白介素1α试剂盒检测原理

人白介素1α(IL-1α)分析检测试剂盒检测原理:

白细胞介素-1，简称白介素1(IL-1)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。白细胞介素（interleukin，IL），简称白介素，是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。

白介素1(IL-1)是一种多肽，分子质量为17ku，有 IL-1a 及 IL-1β 两种亚型。IL-1a由159个氨基酸组成；IL-1β含153个氨基酸；两者由不同的基因分别编码。虽其氨基酸顺序仅有26％的同源性，然而IL-1a和IL-1β以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体，发挥相同的生物学作用。

IL-1受体（IL-1r）IL-1r几乎存在于所有有核细胞表面，每个细胞的IL-1r数目不等，少则几十个（如t细胞），多则数千个（如成纤维细胞）。IL-1r主要有两种类型：一种为IL-1r1，其分子伸入胞浆内的肽链部分较长，起着传

递活化信号的作用；另一种为IL-1r2，胞内部分的肽段较短，不能有效地传递信号，而是将胞外部分的肽链释放到细胞外液中，以游离形式与IL-1结合，发挥反馈抑制作用。gm-csf、g-csf及IL-1自身均可提高细胞IL-1r的表达水平，而tgf及皮质类固醇能降低IL-1r的表达。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-1α抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-1α会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-1α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-1α抗体与结合在包被抗体上的人IL-1α结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-1α浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-1α的浓度。

样品收集:

1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，

取上清检测。

4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。

8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品zui高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品:

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水

4. 吸水纸  

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为250pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、3.906、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制125pg/mL标准品：取0.5mL250pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  

4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）

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