DEAE-琼脂糖凝胶FF操作说明

上海信帆生物供应DEAE-琼脂糖凝胶FF，产品质量稳定，库存充足！

DEAE-琼脂糖凝胶FF

DEAE-琼脂糖凝胶FF是将二乙胺基乙基键合在快流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阴离子交换介质，具有优异的流动性能，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

1. 理化指标

*检测条件： 层析柱16mm×100mm  *柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。

2. 贮存

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方，不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

3. 应用

本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生物试剂，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

4. 使用方法

4.1 装柱

（1）让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理。

（2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。

（3）根据需要量取相应量的凝胶，用去离子水清洗掉20%乙醇。

（4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。

（5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料大耐压）。

4.2 平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris 、PBS等。

4.3 上样

（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再上样。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。推荐的操作pH应在缓冲液pKa的0.5个单位内，并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个pH单位。

Buffers for anion exchange chromatography

4.4 洗脱

DEAE介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。

4.5 再生

一般用高盐浓度的缓冲液（含1~2mol/L NaCl）洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

4.6 在位清洗

（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂类，可用0.1 M NaOH 去除。清洗完毕后，用至少10倍纯水清洗柱子至中性。

4.7 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

5. 保存

使用完的填料，用纯水*冲洗，后保存在4℃（保存溶液为20%乙醇），不能冷冻。

6 注意事项

（1）上样前，样品必须过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用0.45um的过滤器过滤。

（2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔，碱会使流速变慢。

（3）离子交换介质在选择层析柱时，避免使用细长柱，会增加实验操作压力。

（4）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。

DEAE-琼脂糖凝胶FF操作说明