冻干补体，血清总补体如何正确使用

冻干补体，血清总补体如何正确使用

上海信帆生物供应冻干补体，规格为0.5ml一只，一盒10只，使用的时候用蒸馏水复溶，产品现货供应，欢迎大家咨询！

使用方法：每支加0.5ml蒸馏水复溶，静置10分钟后轻轻摇匀；滴定时用缓冲生理盐水或缓冲液(不能含NaN3)做1:5-10倍稀释使用，临用现配。

稳定性：4-8℃保存3年(暗处保存)

用途：总补体溶血活性(CH50)检测使用

产品规格：0.5ml/支*10

注意事项：请穿戴实验服及一次性手套操作。

血清总补体溶血活性(CH50)测定方法一、原理利用绵羊细胞与相应抗体(溶血素)结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血(CH50)时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。

本实验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。

二、试剂及配制

1.缓冲生理盐水：(1)贮存液：Na2HPO4.12H2O2.85gKH2PO40.27gNaCl17.00g蒸馏水定容至100ml4℃保存备用(2)应用液：5ml贮存液加95ml蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1ml，当日配制，12小时内使用。

2.2%绵羊红细胞：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。

3.溶血素：将绵羊红细胞溶血素(效价1:4000)，用应用液做1:2000倍稀释(即1ml溶血素加1999ml应用液)。

4.待测血清：新鲜血液室温放置30min，再4℃放置60min，使血收缩，4℃离心(3000r/min)10min，取上清，-20℃保存。

三、操作步骤试管法(改良Mayer法)

1.致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素(1:2000)，混匀，置37℃水浴30min。

2.稀释血清：待测血清0.2ml，加应用液3.8ml，稀释度为1:20。

3.配制溶血标准管：全溶血管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀。50%溶血管:取全溶血管液2ml加缓冲液2ml。

4.按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30min，第10管为非溶血对照：补体CH50测定试管法

5.结果测定：取出试管，2000r/min离心10min，对照管应不溶血。肉眼比色，选与50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测(波长542nm、0.5cm比色杯)OD值，确定与标准管接近者为终点管，然后按下公式计算CH50值：血清补体CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀释度。如第5管为终点管，测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。

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