内毒素检测试剂盒细菌内毒素去除的原理看这里！

什么是细菌内毒素？
细菌内毒素（脂多糖，LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用，内毒素使机体免疫功能严重受损，进一步的发展可能引发脓毒性休克，弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。因此，内毒素的去除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的，尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、生物疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。

细菌内毒素具有很强的耐热性和化学稳定性，100℃以下无大变化，在120℃高温下加热4小时仅能破坏98%，要*灭活需在180℃高温下，加热2小时以上，这样的方法进行内毒素去除有相当难度。一般化学药品不影响细菌内毒素的活性，只有强酸、强碱或强氧化剂可以破坏细菌内毒素。

内毒素检测试剂盒细菌内毒素去除的原理
因细菌内毒素体积小，耐热性及化学稳定性强，所以一般的过滤、加热和化学方法不易去除或灭活内毒素。现比较常用的内毒素去除方法多为超滤法或亲和层析法。本试剂盒使用的是一类内毒素去除树脂，它以生物安全性*的内毒素特异吸附物质为配体，经此亲和树脂纯化，样品终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。而且经过亲和纯化后没有对人体有毒有害物质残余，适合抗体、疫苗等生物制品的内毒素去除。

内毒素检测试剂盒内毒素去除实验操作
亲和层析内毒素去除的方法操作较简单，具体操作如下：
样品处理：样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。样品PH好控制在7-8，是内毒素结合至柱子上佳pH条件。样品好控制适当的离子强度，减少非特异性吸附，如0.15-0.5M的NaCl。
活化树脂：将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除预装柱顶部的盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干，加入5ml再生缓冲液（预冷），调节流速控制器，保持流速在0.25ml/min（或者1滴/6s），待再生缓冲液流干，再加入5ml再生缓冲液（预冷），再重复操作两次，确保体系保持无热原存在。即使是次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要60分钟完成。

平衡树脂：活化完毕，加入6ml平衡缓冲液（预冷），沿柱管内壁均匀加入其中，保证清洗柱管的内壁，调节流速控制器，保持流速在0.5ml/min（或者1滴/3s），流干平衡缓冲液，再按此操作重复两次。这步操作大约需要40分钟完成。

内毒素去除：2ml样品加到平衡后的层析柱中，调节流速在0.25ml/min（或者1滴/6s），不接收流出液。当样品流完，继续添加样品，样品可以加满柱管，同时收集流出液，即为除热原的样品。为了降低样品的损失，样品流完后，再添加2ml平衡液，并与之前的流出液合并。检测样品浓度及内毒素水平。

再次使用：如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱按照步骤2、3重新再生、平衡，然后上样纯化。

保存条件：如果预装柱用完后需要保存，先用10ml平衡缓冲液（预冷）平衡柱子，待平衡液流干，加入10ml 20%乙醇溶液并于4℃保存。

内毒素检测试剂盒内毒素去除亲和填料的注意事项：
1、内毒素去除用的亲和填料每次使用前都需用再生液和平衡液处理；
2、实验过程中使用的相关溶液和器具均要除热原，防止引入内毒素污染；
3、适当延长填料与样品溶液的处理时间可以加大内毒素的吸附量；
4、样品如果本身是带负性电荷，为增加样品回收率，样品中可以加0.2M NaCl；
5、样品pH在7-8范围内，可以提高内毒素去除效率同时减少非特异性吸附；
6、样品内毒素如果一次去除不*，可以重复，直到合格为止；
7、亲和填料保存条件为20%乙醇，4~8℃。